核酸去除整體解決方案:SuperNuclease核酸酶及其殘留檢測試劑盒

來源: 北京義翹神州科技有限公司   2021-3-15   訪問量:498評論(0)

核酸,這一名詞已經家喻戶曉,尤其在接種新冠疫苗的現場發現核酸殘留,曾一度引起恐慌,隨著研究及取樣調查的深入,人們了解了產生陽性的原因,同時對生物制品的核酸殘留也有了一定的認識。用于疾病治療或預防的生物制品有著嚴格的質量控制,其中核酸殘留是各項質控標準的重中之重。

生物制品的核酸殘留具有潛在的危害性。生物制品的宿主細胞大多是連續傳代細胞,擁有無限增殖的能力。殘留的宿主細胞核酸可能會在人體內造成細胞增殖失控,變為腫瘤細胞。核酸殘留可能存在感染性病毒基因,增加體內免疫反應。因此,從生物制品安全角度和科研需求,進行有效的核酸殘留去除,是非常重要的。
我國參照WHO、FDA和歐盟標準,在藥典中對生物制品的核酸殘留量有明確規定。生物制品的核酸殘留主要集中在重組蛋白、抗體及疫苗的大規模純化及生產過程。藥典規定要求酵母、大腸桿菌表達的生物制品中DNA殘留量不超過10ng/劑,CHOVero細胞表達的EPO、狂犬疫苗、乙肝疫苗等不超過10010pg/劑。
在一般的情況下,含氯消毒液、紫外燈照射等能夠消除環境或產品表面的核酸,但是對于生物制品在生產過程中產生的核酸,就需要專業的核酸去除劑了,F在大多選擇核酸酶進行去除。核酸酶能夠消除核酸殘留的潛在危害,降低樣品粘度,提高產品純化效率。

SuperNuclease核酸酶:高效去除核酸殘留
SuperNuclease是一種來自于粘質沙雷氏菌(Serratia marcescens),經基因工程改造的核酸內切酶。SuperNuclease可降解雙鏈、單鏈、線狀、環狀的DNARNA,完全將核酸降解成3~5個堿基長度的5'-單磷酸寡核苷酸。因其能高效降解任何形式的DNARNA,又被稱為“全能核酸酶”。
在菌液懸浮液中加入SuperNuclease核酸酶,發現北京義翹神州的核酸酶在同濃度下降解核酸的能力比同類公司的效果要好。

SuperNuclease核酸酶的耐受性
北京義翹神州從溫度、Mg離子、pH值、緩沖體系、鹽濃度等多個方面分析SuperNuclease核酸酶的耐受性,發現核酸酶能夠適用于多種實驗環境。

溫度 50℃以內活性隨溫度線性升高
Mg2+ 只有在有Mg離子時核酸酶才具有較高的活性,并在5mM時達到最大
pH 隨著pH的升高活性逐漸升高,在pH9時達到頂峰,隨后下降
緩沖體系 在同pHTris體系活性大于磷酸鹽體系
鹽濃度 0.5M NaCl以內活性不受影響,當濃度大于0.5M時活性急劇下降致失活
去污劑 低濃度的去污劑對活性有促進作用,當濃度大于1/1000w/v)時開始有抑制作用。Triton X 100DOC抑制效果尤其明顯
SDS 任何濃度的SDS都會讓核酸酶在10min內失活
尿素 低濃度的尿素對核酸酶活性有促進作用,在4M尿素時達到最大活性,當尿素濃度達到7M以上時,核酸酶會在十分鐘內失活
硫酸銨 0-100mM內隨濃度增加活性降低,但最終保持有60%活率
活性穩定性 冷凍儲存條件下活性穩定,實驗范圍內(1年)沒有降低趨勢

SuperNuclease核酸酶的性能參數
通過以上的檢測數據,可以看出SuperNuclease核酸酶基本參數良好,穩定性高。
反應條件 最佳范圍 有效范圍
Mg2+ 1-2 mM 1-10 mM
pH 8.0-9.5 5.5-9.5
溫度 37 0-50
DTT 0-200 mM >200 mM
鹽濃度 0-100 mM 0-400 mM
磷酸鹽 0 mM 0-50 mM
Tween 20 0-0.8% >0.8%
Brij 35 0-0.8% >0.8%
注:最佳范圍:SuperNuclease核酸酶活性在90%以上的反應條件;有效范圍:酶活性在15%以上的反應條件。

SuperNuclease核酸酶檢測試劑盒
核酸酶屬于重組蛋白表達產品,在生物制品中同樣不能有殘留,所以在生物制品生產過程中使用核酸酶去除核酸后,還需要對核酸酶進行清除,并且進行檢測,確保產品符合生產標準要求。
北京義翹神州開發的核酸酶試劑盒(KIT-SSNP01)可用于檢測和定量分析樣品中的核酸酶殘留量,具有靈敏度高、特異性好、通用性高等優點。

SuperNuclease核酸酶產品信息
貨號 名稱 規格
SSNP01 SuperNuclease 10KU/50KU/500KU
GMP-SSNP01 SuperNuclease 10KU/50KU/500KU
KIT-SSNP01 SuperNuclease ELISA Kit 1 Kit (96 Tests)

參考文獻:
1. 藥典2015(中國)
2. 藥典USP38-NF33(美國)
3. Li Si-Ming, Bai Fu-Liang, Xu Wen-Juan, et al. Removing residual DNA from Vero-cell culture-derived human rabies vaccine by using nuclease. 2014, 42(5):271-6.
4. Merten O W, Hebben M, Bovolenta C. Production of lentiviral vectors[J]. Molecular Therapy Methods & Clinical Development, 2016, 3:16017.



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