流式分選/流式檢測細胞凋亡/流式檢測細胞周期威斯騰生物

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技術服務信息

服務名稱:流式分選/流式檢測細胞凋亡/流式檢測細胞周期
服務類別:細胞生物學服務 - 流式細胞檢測服務
價格:歡迎來電詳詢023-65316016,023—65316556
允許參觀:允許參與實驗
所在區域:重慶.重慶
更新時間:2021/5/8 9:57:00
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服務商:威斯騰生物
誠信指數:1850點
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使用范圍:僅限科研使用,不能應用于臨床
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威斯騰生物
地址:
重慶高新區生物醫藥研發產業園D棟
郵編:
400039
電話:
4006756758
傳真:
023-65316016
聯系人:
張老師
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重慶·重慶
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技術服務詳細描述


流式分選/流式檢測細胞凋亡/流式檢測細胞周期


式分選

流式細胞術(Flow Cytometry, FCM)是七十年代發展起來的高科學技術,它集計算機技術、激光技術、流體力學、細胞化學、細胞免疫學于一體,它不僅可測量細胞大小、內部顆粒的性狀, 還可檢測細胞表面和細胞漿抗原、細胞內DNA、RNA含量等,在血液學、免疫學、腫瘤學、藥物學、分子生物學等學科廣泛應用。

服務內容:

淋巴細胞、造血干細胞、內皮細胞和成纖維細胞等多種細胞的分選。

客戶須知:

客戶須按流式細胞分選要求制備細胞樣品,保證實驗樣品的絕對無菌,并同時提供陰性對照樣品。

客戶在提交樣本前,需附詳細書面說明材料,說明實驗目的、樣品來源及處理方法等信息,并詳細說明檢測要求。

 

流式細胞術檢測細胞凋亡 

操作步驟
1、用預冷的PBS洗滌細胞兩次,之后用1X的結合緩沖液重懸細胞, 調節細胞濃度到1X106Cells/ml;
2、取100μl調節好濃度的細胞懸液到5ml流式管底部;
3、加入Annexin V標記蛋白和相應的核酸染料(標記的Annexin V與核酸染料均需要摸索到合適的使用濃度,商品化試劑盒按照說明書操作);
4、均勻混合,室溫避光反應15分鐘;(若是用Annexin V-Biotin標記蛋白染色,反應后用1X的結合緩沖液洗滌細胞一次,再加入合適濃度的標記鏈霉親和素Streptavidin,再加入合適的核酸染料,室溫避光反應15分鐘)
5、向流式管中加入400μl 1X的結合緩沖液,重懸后及時上流式細胞儀進行分析.操作注意事項

1、補償對照管很重要;
2、細胞處理需要小心操作,盡量避免人為的損傷細胞;
3、細胞濃度與染色用的蛋白量要合適;
4、對不同藥物濃度和藥物作用時間要進行摸索;

儀器:

實驗所用的流式細胞儀為COULTER EPICS XL。

樣本要求

1)單個細胞:1~2×106 個細胞左右;來源于人、小鼠、大鼠或其它。

2)外周血:EDTA或肝素抗凝全血,5ml左右;來源于人、小鼠、大鼠或其它。

 

流式細胞儀進行細胞周期檢測(PI)

細胞周期的定義
生命是從一代向下一代傳遞的連續過程,因此是一個不斷更新、不斷從頭開始的過程。細胞的生命開始于產生它的母細胞的分裂, 結束于它的子細胞的形成,或是細胞的自身死亡。通常將通過細胞分裂產生的新細胞的生長開始到下一次細胞分裂形成子細胞結束為止所經歷的過程稱為細胞周期。在這一過程中,細胞的遺傳物質復制并均等地分配給兩個子細胞。

PI能夠插入雙鏈DNA中。它被活細胞排斥但能穿透正在死亡或已經死亡的細胞的細胞膜。
1)PI單染色的固定方法:
1.收集細胞(1~5)×106個,500~1000r/min離心5min,棄去培養液。
2.3ml PBS洗一次。
3.離心去PBS,加入冰預冷的70%的乙醇固定,4℃,1h。
4.離心棄去固定液,3ml PBS重懸5min。
5.400目的篩網過濾1次,500~1000r/min離心5min,棄去PBS。
6.用1ml PI染液,4℃避光30min。
7.流式細胞儀檢測:PI用氬離子激發熒光,激發光波波長為488nm,發射光波波長大于630nm,產生紅色熒光,可分析前散射光對側散射光的散點圖及PI熒光的直方圖。

2方法:
將樣品細胞按程序描述的方法用FITC標記的單克隆抗體進行單色染色。
A、在最后的洗滌步驟后,將樣品細胞懸浮于PI緩沖液中,于4℃下密封避光保存以備通過流式細胞儀分析;
B、在最后的洗滌步驟后,如前述將樣品細胞懸浮后備用。如果您想檢測樣品細胞活力,在每一管中加入2μl的PI濃縮液,混勻。將樣品置于4℃下密封避光保存以備流式細胞儀分析。

威斯騰實驗服務流程


威斯騰生物服務項目

分子生物學檢測蛋白質與免疫學動物實驗
實時熒光定量PCR單克隆抗體制備帕金森疾病模型
免疫共沉淀(Co-IP多克隆抗體制備抑郁癥動物模型
ELISA(酶聯免疫吸附法)技術Western-blot 實驗服務脊髓損傷模型
生化指標檢測蛋白雙向電泳實驗服務腦外損傷模型
雙熒光素酶報告基因檢測原核蛋白表達純化骨神經損傷模型
染色質免疫共沉淀(ChIP真核蛋白表達純化心肌缺血模型
GST pull DownITRAQ定量蛋白質組學心力衰竭模型
SLAC蛋白組學肺動脈高血壓動物模型
高血壓模型
病毒包裝實驗課題整體外包粥樣動脈硬化模型
過表達/干擾慢病毒包裝純化整體課題外包大腦中動脈阻塞模型
過表達/干擾腺病毒包裝純化細胞整體實驗外包慢性之氣管炎模型
逆轉錄病毒包裝純化動物整體實驗外包過敏性哮喘模型
腺相關病毒包裝純化肺炎大鼠模型
肝炎-肝硬化-肝癌模型
蛋白芯片原代細胞培養肝纖維化模型
細胞因子芯片骨髓間充質干細胞培養膽結石模型
BioPlex懸浮芯片脂肪干細胞培養急性胰腺炎模型
生長因子芯片心肌成纖維細胞培養急性腎衰竭模型
炎癥因子芯片軟骨細胞培養體內血栓模型
血管生成因子芯片血管內皮細胞培養關節炎模型
凋亡因子芯片神經元細胞培養I型和II型糖尿病模型
趨化因子芯片內皮組細胞原代培養裸鼠成瘤
HuProt TM 20K人類蛋白組芯片基因編輯動物
電生理相關服務動物整體實驗服務
膜片鉗實驗
細胞生物學檢測高通量測序代謝組學
細胞原代培養mRNA測序氣相色譜GC/MS
MTT檢測LncRNA測序液相色譜LC/MS
細胞凋亡檢測全基因組測序核磁共震NMR
細胞周期檢測RNA-Seq測序
細胞克隆形成實驗外顯子測序影像學相關實驗
Transwell細胞遷移/侵襲16s擴增子測序Micro-CT
流式分選Small RNA測序小動物活體成像
CCK8/XTT檢測宏基因組測序核磁共振
臺盼藍檢測細胞活性單細胞測序PET-CT
藥物篩選細胞學實驗circleRNA測序
細胞粘附性檢測甲基化測序基因編輯動物
細胞劃痕實驗條件性敲除小鼠/大鼠
細胞生物學整體實驗全基因敲除小鼠/大鼠
細胞成管實驗
病理檢測CRISPR/Cas9細胞敲除/敲入基因芯片
掃描電鏡基因定點突變細胞系LncRNA芯片
透射電鏡單基因敲除細胞系miRNA芯片
HE染色多基因敲除細胞系mRNA芯片
免疫組化目的基因敲入細胞系甲基化芯片(限人和小鼠來源樣本)
Tunel(原位末端凋亡法)檢測報告基因敲入細胞系SNP芯片(限人和小鼠來源樣本)
激光共聚焦miRNA/LncRNA敲除細胞系
免疫熒光
Masson染色CRISPR/Cas9動物敲除/敲入科研設計指導&文章評估/潤色
原位雜交基因敲除大鼠/小鼠科研文獻論著翻譯
熒光原位雜交基因敲入大鼠/小鼠論文翻譯潤色服務
特殊染色(PSA、茜素紅、阿爾新藍等)臨床實驗/科研實驗設計方案指導
行為學檢測

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