小鼠心肌細胞培養威斯騰生物

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技術服務信息

服務名稱: 小鼠心肌細胞培養
服務類別:細胞生物學服務 - 細胞培養服務
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允許參觀:允許參與實驗
所在區域:重慶.重慶
更新時間:2021/5/8 9:57:00
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服務商:威斯騰生物
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技術服務詳細描述

小鼠心肌細胞培養


原代培養心肌細胞作為一種主要的研究模型,被廣泛應用于心血管研究之中,我中心擁有專業的細胞培養技術平臺,為客戶提供心肌培養技術服務。

實驗步驟

小鼠心肌細胞培養過程:

 1. 把兩個5ml注射器分別插入DMEM和胰酶中,分別向兩個圓皿中加入5ml的DMEM培養液。用一把大鑷子從鼠盆里取出一只生后2~3天的SD大鼠,放入0.1%新潔爾滅浸泡一下后拿出放在泡沫板上,用針頭把鼠固定(位置擺正),用另一把大鑷子取***酒棉球擦皮膚,再用酒精棉球脫***,取一把小剪子及小鑷子開皮,充分撕拉開,再用酒精棉球消毒,后換另一把小剪子和鑷子在劍突處正中線稍偏左開胸取心。

2. 取出的心放在剛才準備的一個裝有DMEM的圓皿中再取下一只。重復以上過程。(鼠全部殺死后,把取鼠鑷及泡沫板、新潔爾滅缸等拿出臺面。消毒、清潔,鋪紗布、換手套。

3.用第三副剪子和鑷子把圓皿中的心臟周邊的血凝及纖維組織剔除掉,放在另一個預先裝好DMEM的圓皿中。抽取5ml的胰酶,然后將其中少許放入50ml的小燒杯中,大部分倒入三角燒瓶中。用第四副剪子將燒杯中的心臟剪成1mm3的碎塊,倒入三角燒瓶中(可用剪刀刮入),再用剩余胰酶刷凈燒杯。

4.把溫度計和三角燒杯放入250ml燒瓶中,(事先調好水量,多會沒過三角燒杯,少溫度會不均勻)。打開磁力攪拌器電源,調溫度(使-緩慢加到34~35℃)和轉速(轉速不可過快,否則會打碎細胞,基本上標志為平行)。一定要注意***。

5.溫度達到34℃時開始計時,第一次為10分鐘,以后可為8分鐘,事情況而定。在此期間,在試管架上擺上5、6個離心管,標上1、1,2、2。其中在1號兩管事先加入DMEM液各2毫升。

6.10分鐘后,把三角燒瓶取下,磁力攪拌器關上,用一個吸管輕輕吹打(使消化下來的細胞徹底從組織團快上掉下來),這個吸管(1)用后固定放在一個離心管中,以后每次消化后取下都用其吹打幾下,第一次上清棄去,然后向兩個1號管分別倒入2ml上清(盡量不要把組織倒出,也不要剩液太多,以免消化下的細胞重復消化造成損傷),用另一個吸管(2)混勻配平兩個管(即兩個管水平高度相同),輕輕吹打,以免損壞細胞。

7.接著把這兩個離心管放入離心機中,調10分鐘,800或1000轉,墊小鎖,打開關。
8.同時向三角燒瓶中加入5ml胰酶,繼續消化8分鐘,注意控制溫度。此時向兩個2號管中分別加入2mlDMEM液。

9.取下三角燒瓶,仍用1號吸管吹打,后靜置片刻向兩個2號管分別倒入2毫升的上清,取出兩個離心后的1號管,把上清液沿細胞貼壁一方慢慢倒掉,后向其中一管加入4ml的DMEM液,用2號吸管取少量液體加入另一個離心管中,把管底的沉淀細胞洗下來,把液體全部移入其中一管,三個管(1個1號管,兩個2號管)配平,放入離心管中,離心十分鐘。同時仍加5ml的胰酶,放入三角燒瓶中,繼續消化(注意控制溫度,達34℃時計時)。

10.消化到4次左右,吹打均勻后,吸一滴滴在載玻片上,拿到鏡下觀察消化情況,決定消化次數。

11.離心2次的吸管,放在試管架上,待離心過程全部完事后,把各管上清液倒掉,在各管加上3ml(不用精確,大致這樣)DMEM液,記住共加入多少DMEM液的量,換吸管(3號)把各管底細胞塊吸下吹打均勻后,移入50ml燒杯中,然后用注射器抽取余量的DMEM加入燒杯中,加入小牛血清及抗生素,換吸管(4號)吹打均勻。

12.取出24孔培養板,一個人吹打,另一個人用加樣器加藥。封蓋時過火,蓋上蓋,放在CO2孵箱。24小時后觀察是否貼壁。(24孔板,每孔最多加2ml,一般加液時每孔加1~1.5ml)

威斯騰生物服務流程



威斯騰生物服務項目

分子生物學檢測蛋白質與免疫學動物實驗
實時熒光定量PCR單克隆抗體制備帕金森疾病模型
免疫共沉淀(Co-IP多克隆抗體制備抑郁癥動物模型
ELISA(酶聯免疫吸附法)技術Western-blot 實驗服務脊髓損傷模型
生化指標檢測蛋白雙向電泳實驗服務腦外損傷模型
雙熒光素酶報告基因檢測原核蛋白表達純化骨神經損傷模型
染色質免疫共沉淀(ChIP真核蛋白表達純化心肌缺血模型
GST pull DownITRAQ定量蛋白質組學心力衰竭模型
SLAC蛋白組學肺動脈高血壓動物模型
高血壓模型
病毒包裝實驗課題整體外包粥樣動脈硬化模型
過表達/干擾慢病毒包裝純化整體課題外包大腦中動脈阻塞模型
過表達/干擾腺病毒包裝純化細胞整體實驗外包慢性之氣管炎模型
逆轉錄病毒包裝純化動物整體實驗外包過敏性哮喘模型
腺相關病毒包裝純化肺炎大鼠模型
肝炎-肝硬化-肝癌模型
蛋白芯片原代細胞培養肝纖維化模型
細胞因子芯片骨髓間充質干細胞培養膽結石模型
BioPlex懸浮芯片脂肪干細胞培養急性胰腺炎模型
生長因子芯片心肌成纖維細胞培養急性腎衰竭模型
炎癥因子芯片軟骨細胞培養體內血栓模型
血管生成因子芯片血管內皮細胞培養關節炎模型
凋亡因子芯片神經元細胞培養I型和

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