哺乳動物穩定轉染細胞系構建上海銳賽生物技術有限公司

技術服務信息

服務名稱:哺乳動物穩定轉染細胞系構建
服務類別:細胞生物學服務 - 細胞培養服務
價格:1000-10000元
允許參觀:不允許參與實驗
所在區域:上海.上海
更新時間:2019/6/11 9:36:00
瀏覽人數:18272
誠信指數:3100點
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使用范圍:僅限科研使用,不能應用于臨床
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上海銳賽生物技術有限公司
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上海市浦東新區康新公路3399弄時代醫創園25號樓17層
郵編:
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聯系人:
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上!ど虾
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技術服務詳細描述

通過脂質體介導轉染法及電穿孔等基因轉染技術,將靶基因被導入細胞后,一般在轉染后48小時,靶基因即在細胞內表達。根據不同的實驗目的,48小時后即可進行靶基因表達的檢測等實驗(即瞬時轉染)。如若建立穩定的細胞系,則可對靶細胞進行篩選,根據不同基因載體中所含有的抗性標志選用相應的藥物,最常用的真核表達基因載體的標志物有潮霉素(hygromycin)和新霉素(neomycin)。篩選后可以得到穩定表達外源基因的細胞克隆,這就是穩定轉染。穩定轉染的質粒DNA整合到染色體上,使得轉染的細胞可長期表達。

應用:
目的基因過表達穩定表達細胞系建立
目的基因RNAi干擾沉默的細胞系建立
microRNA過表達/干擾的細胞系建立

實驗原理應用:

    穩轉細胞株是指經合適的藥物濃度進行藥物篩選后,得到外源DNA穩定整合到宿主染色體,并可以長時間表達外源目的基因的細胞。穩定表達細胞株彌補了瞬時感染(或轉染)實驗中外源基因表達時間短的缺陷,便于長期觀察。穩轉細胞的篩選需根據不同基因載體中所含有的抗性標志選用相應的藥物,常用的抗性篩選有嘌呤霉素(puromycin)、潮霉素(hygromycin)、新霉素(neomycin)、滅稻瘟素(Blasticidin)等。若實驗需求構建穩轉細胞株,我們建議通過慢病毒感染細胞進行藥物篩選的方法,此方法較質粒轉染可以更加有效的將外源基因整合入基因組,且整合位點處于轉錄相對活躍的區域,從而獲得更加高效表達外源基因的穩轉株細胞。

實驗流程


 

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